溃疡性结肠炎患者及其配偶的肠道菌群构成与多

溃疡性结肠炎（UC）主要是以累及直肠和结肠的慢性非特异性炎症性肠病。研究表明，UC在欧洲的发病率已达0.97～57.9/10万人，亚洲和中东近几年发病率快速上升，达0.15～6.5/10万人［1-2］。目前认为UC是免疫、遗传、环境及肠道菌群等多因素共同作用的结果。研究表明，某些肠道菌群释放大量毒素损伤黏膜，诱导细胞死亡并刺激细胞炎症因子释放，引起肠道黏膜炎症反应［3-4］。此外，外界环境同样是引起UC发病的因素之一［5］。本文比较UC患者与其同一生活环境下患者家属，以及与正常体检人群肠道菌群的差异性，探讨生活环境与肠道菌群环境间的相关性在UC发病中的作用。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取2019年1月至7月浙江中医药大学附属第二医院UC患者8例（UC组）及其配偶8例（UF组），同时招募本院体检健康者8例（ZC组）。本项目经本院医学伦理委员会批准。（1）纳入标准：①年龄18～60岁，性别不限；②根据患者临床表现、肠镜及病理结果，参照《炎症性肠病诊断与治疗的共识意见（2018年）》［6］的UC诊断标准，由消化内科及病理科医师共同确诊为UC。③UC配偶组需与UC患者共同生活至少5年、无全身系统性疾病且肠镜检查正常；④健康人群组需与UC患者无血缘关系且不在同一家庭环境下生活；⑤健康人群组无全身系统性疾病且肠镜检查未见肠道病变；⑥所有入选者均签署知情同意书。（2）排除标准：①重度或急性暴发型UC患者；②近2个月内使用抗生素、益生菌制剂及清洁灌肠者；③既往有消化道疾病手术史；④妊娠及哺乳期女性、儿童及精神病患者；⑤患有严重心、脑、肺、肝、肾疾病或高血压、心脏病、糖尿病等慢性疾病。

1.2 方法 （1）粪便样本采集：采集所有入选者自然排出的新鲜粪便（＞2 g），迅速将粪便装于无菌样品管中，样品管冰浴1 h内运送至中心实验室无菌条件下进行分装，液氮冷却后置于-80 ℃超低温冰箱中保存。（2）样本DNA提取、基因组PCR扩增及16S rRNA测序：应用QIAamp DNA Stool Extraction Kit试剂盒从粪便样本中提取肠道微生物基因组DNA后，使用引物341F（5'-CCTACGGGNGGCWGCAG-3'）和805R（5'-GACTACHVGGGTATCTAATCC-3'）［7］对细菌16S rRNA基因的V3-4可变区进行PCR扩增［7］。扩增条件为95℃解链3 min，95℃30 s，55℃，30 s，72℃45 s，25个循环，72 ℃延伸5 min。用1.0%琼脂糖凝胶电泳对PCR产物进行质检并纯化。利用Nextera XT Index Kit中的引物在待测DNA的两端接入adaptor序列，用于后续MiSeq上机测序。（3）测序数据分析：剔除原始序列中不含引物、长度在300～480 bp以外、质量评分≤20、含有模糊碱基N及嵌合体的序列，得到最终用于分析的优质序列。将相似度在97%的优质序列聚类为一个操作分类单元（OTU），并用SILVA数据库进行生物学鉴定。最终得到所有OTU表，采用Qiime 软件进行多样性指数分析、主成分分析及菌落组成分析。

1.3 统计学方法 采用SPSS 26.0统计软件。计量资料以（±s）表示，多组间比较用方差分析，多重比较采用LSD-t检验；方差不齐时，采用Kruskal-wallis H检验。计数资料组间比较采用卡方检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 三组基线资料比较 见表1。

表1 三组基线资料比较（±s）组别 n 年龄（岁） 男/女（n） BMI（kg/m2）ZC组 8 36. 4/4 20. UC组 8 43. 4/4 21. UF组 8 41. 4/4 21.

2.2 肠道菌群物种多样性分析 物种多样性分析采用Alpha多样性指标，Alpha多样性是反映丰富度和均匀度的综合指标。丰富度即种类数目；多样性即群落中个体分配上的均匀性。本研究中群落丰富度的指数以Chao1指数表示。群落多样性的指数以Shannon指数表示。（1）Chao1指数：每条曲线代表一个样本，末端数字为实际测序条数。Chao1指数越大，表明群落的丰富度越高。测序序列从15,000起曲线趋于平坦，表明此时测序已趋于饱和，测序数据量合理。三组间Chao1指数差异无统计学意义（P＞0.05）。见图1。（2）Shannon指数：每条曲线代表一个样本，末端数字为实际测序条数。Shannon指数值越高，表明群落的多样性越高。测序序列曲线较早趋于平坦，表明此时测序已趋于饱和，测序数据量合理。三组间Shannon指数差异无统计学意义（P＞0.05）。见图2。

图1 Chao1指数曲线注：横坐标表示从样品中随机抽取的序列数，纵坐标表示抽取后分析得到的理论数目，3种颜色的线条表示三组样本

图2 Shannon指数曲线注：横坐标表示从样品中随机抽取的序列数，纵坐标表示抽取后分析得到的理论数目，3种颜色的线条表示三组样本

文章来源：《环境昆虫学报》 网址: http://www.hjkcxbzz.cn/qikandaodu/2021/0610/1509.html